【儀表網 行業標準】根據《中華人民共和國標準法》文件精神，由廣西大學、廣西西大檢測有限公司、廣西亞熱帶作物研究所、廣西壯族自治區產品質量檢驗研究院、廣西思浦林科技有限公司共同起草的《葡萄植株中7種植物激素含量的測定 液相色譜-質譜/質譜法》征求意見稿已完成，依據《團體標準管理規定》和《廣西農產品質量安全服務協會團體標準管理辦法》的有關規定，現向社會公開征求意見。
本文件按照GB/T 1.1—2020《標準化工作導則 第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。
本文件描述了液相色譜-質譜/質譜法測定葡萄植株中7種植物內源激素含量的原理，規定了試劑和材料、儀器和設備、分析步驟、結果計算和表述、精密度等的要求。
本標準適用于葡萄植株的葉、芽、果等組織中玉米素、玉米素核苷、赤霉素A3、生長素、水楊酸、茉莉酸、脫落酸含量的測定。
原理：
試樣用異丙醇混合溶液低溫震蕩提取植物激素，經反相色譜柱分離，液相色譜-質譜/質譜法進行測定，外標法定量。
儀器和設備：
1.液相色譜-質譜/質譜儀：配電噴霧離子源(ESI)。
2.電子天平：感量0.1mg。
3.渦旋混勻器。
4.低溫震蕩儀：溫度可至5℃。
5.超低溫冰箱：溫度可至-80℃。
6.氮吹儀。
樣品制備：
分別取新鮮的葡萄植株的葉、芽、果等部位供試樣，迅速用超純水洗凈樣品附著的雜物，表面水分用吸水紙擦干，立即保存于液氮中。將樣品從液氮中取出，置于研缽中加液氮磨細，混勻，立即轉移至-80 ℃冰箱避光保存。
試樣處理：
稱取0.2g(精確至0.1mg)制備好的試樣于15mL 塑料離心管中，加入2mL 預冷(4 ℃)的提取劑(5.5)，置于5℃震蕩儀中以200r/min 振蕩1h，再加入4mL 預冷(4 ℃)的二氯甲烷(5.3)，繼續震蕩1h，取二氯甲烷層氮吹至近干。加入0.5mL 預冷(4 ℃)的50%甲醇溶液(5.6)復溶，漩渦混勻，經0.22μm 濾膜過濾，濾液供液相色譜-質譜/質譜儀測定。
液相色譜參考條件：
a)色譜柱：BEH C18柱，2.1 mm × 100mm，粒度1.7 μm，或性能相當者；
b)流動相：流動相A為0.1%甲酸水溶液，流動相B為甲醇，梯度洗脫程序見表1；
c)流速：0.3mL/min；
d)柱溫：40 ℃；
e)進樣量：5μL。
質譜參考條件：
a)離子源：ESI源；
b)掃描方式：正離子掃描模式和負離子掃描模式(參見附錄B)；
c)檢測方式：多反應監測(MRM)；
d)干燥氣、霧化氣、碰撞氣均為高純氮氣，使用前應調節各氣體流量以使質譜靈敏度達到檢測要求，參考條件參見附錄B；
e)監測離子對、錐孔電壓、碰撞能量等參數應優化至最佳靈敏度，參考條件參見附錄B。
精密度：
1.在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不大于其算術平均值的15%。
2.在再現性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不大于其算術平均值的20%。
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